Retroviruso testavimas

Aptikimo metodai

Metodo principai

Reguliavimo dėmesys

Bendro auginimo tyrimas

Šis metodas naudoja jautrias indikatorines ląsteles infekcinėms viruso dalelėms užfiksuoti ir nustato užterštumo būseną, stebėdamas tokius reiškinius kaip citopatinis poveikis, židinio formavimasis arba specifinio antigeno ekspresija. Tai gali parodyti infekcinių retrovirusinių dalelių buvimą.

• Privalomi bandymo tikslai: EOPC ląstelės arba gamybos{0}}ribotos pralaidos ląstelės.

• Pagrindinė testavimo procedūra: turi būti naudojama dviejų{0}}pakopų ko-kultūros sistema (viruso amplifikacijos fazė ir aktyvumo indikatoriaus fazė).

• Jautrių ląstelių reikalavimai: atsižvelgiant į tiriamų ląstelių rūšį ir kilmę, retrovirusinio užkrečiamumo tyrimams turi būti naudojamos skirtingos arba kelios jautrios ląstelių linijos.

• Kultūros paskirstymo reikalavimai: kad būtų užtikrintas tinkamas galimo viruso amplifikavimas, ko-kultūros sistema turi būti pasėta mažiausiai 5 kartus (paprastai daugiau).

Transmisijos elektronų mikroskopija

Šis metodas naudoja didelės-raiškos elektronų mikroskopiją, kad būtų galima tiesiogiai stebėti virusinių dalelių morfologiją ir struktūrą (pvz., tipinę ikosaedrinio apvalkalo struktūrą ir nukleokapsidės morfologiją), todėl galima vizualiai identifikuoti ir atlikti kiekybinę analizę. Jis gali aptikti žinomas ir nežinomas virusines daleles, įskaitant daleles, kurios nesidaugina- arba tas, kurios neužfiksuojamos atliekant užkrečiamumo tyrimus.

• Privalomi bandymo tikslai: EOPC ląstelės arba gamybos{0}}ribotos pralaidos ląstelės.

• Pagrindinis reikalavimas: turi būti nustatytas retrovirusinių dalelių tipas ir kiekis.

• Reikalavimai pavyzdžiui: reikalingas itin plonas pjūvis, paprastai reikia sistemingai stebėti mažiausiai 200 ląstelių.

• Specialios nuostatos (Kinijos farmakopėja, 2025 m.): Tam tikroms graužikų ląstelėms (pvz., CHO, BHK-21) arba vabzdžių ląstelėms taip pat turėtų būti nustatytas viruso dalelių kiekis derliaus skystyje ir jų užkrečiamumas.

Atvirkštinės transkriptazės tyrimas

Remiantis atvirkštinės transkriptazės, katalizuojančios DNR sintezę iš RNR šablono, savybėmis, retrovirusų buvimą galima netiesiogiai nustatyti aptikus reakcijos produktų radioaktyvius arba fluorescencinius signalus, kad būtų galima kiekybiškai įvertinti fermento aktyvumą. Šis metodas nepriklauso nuo viruso užkrečiamumo ir gali plačiai aptikti virusines daleles, turinčias fermentinį aktyvumą.

• Išimties paaiškinimas: ir ICH Q5A(R2), ir Kinijos farmakopėjoje (2025 m. leidimas) aiškiai nurodyta, kad šio tyrimo nereikia atlikti ląstelėms, kurios gamina retrovirusus (pvz., tam tikras graužikų, vabzdžių ir paukščių ląsteles).

• Alternatyvūs reikalavimai: išimties atvejais turi būti atliktas išsamesnis viruso dalelių tipo, kiekio ir užkrečiamumo tyrimas.

PGR arba kiti specifiniai in vitro metodai

Atsižvelgiant į ląstelių rūšinį specifiškumą, kai atvirkštinės transkriptazės aktyvumo rezultatai yra neaiškūs arba jų negalima išmatuoti, galima naudoti rūšiai{0} būdingus retrovirusų aptikimo metodus, pvz., retroviruso PGR, imunofluorescenciją, ELISA ir kt. Kiekybinė retrovirusų PGR taip pat gali būti naudojama retrovirusų dalelių kiekybiniam įvertinimui.

• Pirminis padėties nustatymas: paprastai naudojamas kaip svarbus aukščiau paminėtų pagrindinių metodų priedas ir specifiškumo patvirtinimo įrankis.

• Taikymo scenarijai: dažniausiai naudojamas labai jautriai aptikti ir kiekybiškai nustatyti konkrečius žinomus virusus (pvz., qPCR) arba pateikti molekulinio -lygmens įrodymus, kai užkrečiamumo / elektroninės mikroskopijos rezultatai yra abejotini.

• Reguliavimo pagrindas: jo taikymas reikalauja kruopštaus patvirtinimo ir turi atitikti atitinkamas specifinių aptikimo metodų patvirtinimo tikslinėje rinkoje gaires (pvz., Kinijos farmakopėja (2025 m. leidimas)).

Profesionalios paslaugos

Visapusiška apsauga jums

Visuotinis atitikties metodas

Mūsų testavimo metodai yra glaudžiai integruoti su pagrindiniais ICH Q5A(R2), Kinijos farmakopėjos (2025), USP ir EP reikalavimais, teikiant vieno -sustabdymo paslaugą, apimančią užkrečiamumo tyrimus, perdavimo elektronų mikroskopiją (TEM) ir atvirkštinės transkriptazės aktyvumo aptikimą, efektyviai palaikančius vienu metu taikomą taikymą keliuose JAV regionuose ir Europoje.

Plataus{0}}spektro aptikimo galimybė

Turime įvairių jautrių ląstelių linijų ir brandžių metodų skirtingiems rizikos scenarijams, kurie gali veiksmingai aptikti tikslinius patogenus, įskaitant pelių retrovirusus, tropizmo retrovirusus ir vabzdžių retrovirusus, užtikrinant platų aptikimo spektrą ir specifiškumą.

Nuosavas elektroninės mikroskopijos platforma

Turime savo didelės raiškos{0}}transmisijos elektronų mikroskopą ir aukšto rango profesionalų techninę komandą, kuri užtikrina uždaros{1} kilpos kokybės kontrolę viso proceso metu nuo mėginio paruošimo iki duomenų išvedimo. Taip pat galime teikti greitas kiekybines žaliavų (UPB) paslaugas, kad tiksliai palaikytume tolesnio viruso pašalinimo patikrinimą.

Išsamus metodo patvirtinimas

Visi metodai atliekami pagal GMP/GLP standartus, griežtai laikantis Kinijos farmakopėjos (2025 m. leidimas) ir ICH Q2(R2), kad būtų visapusiškai patvirtintas specifiškumas, aptikimo ribos ir kt. Teikiame pilną -ciklo projektų valdymą nuo protokolo kūrimo iki programų palaikymo, užtikrindami duomenų atitiktį ir patikimumą.

Duomenų vientisumo apsauga

Nuo mėginio gavimo ir eksperimento vykdymo iki ataskaitos išrašymo sukūrėme visą kokybės sistemą, atitinkančią GMP ir ALCOA+ principus. Naudodami profesionalią kelių{2} lygių duomenų peržiūrą ir patikimą nukrypimų kontrolės (CAPA) mechanizmą, iš esmės užtikriname aukštą-kokybišką ir audituojamą kiekvieno projekto pristatymą.